鸡腿菇菌丝生长温度为5℃～35℃，适宜的温度为22℃～28℃。
接种后3天内，以保湿和控温为主，温度控制在25℃～28℃，不通风，不移动菌袋或不揭薄膜。袋栽时，室内空气湿度控制在70％左右；床畦栽培，空气湿度为80％，接种3天后揭膜通气。菌袋栽培时，7天左右翻堆防杂。发菌中期室温保持在20℃～25℃，注意通风，防止烧菌。正常情况下，经30～35天菌丝布满菌袋。
脱袋覆土。鸡腿菇的菌丝长满后，必须覆土才能正常出菇。将发满菌丝的菌袋脱袋，排放在菇房（菇棚）床畦上，菌筒相距2～3厘米，间隙用土填平，所有菌筒排好后上面覆土3～5厘米厚。覆土应选择菜园、果园、麦田或稻田土，也可用自制混合土。覆土使用前需经消毒处理，最好的消毒方法是用蒸汽加热，当温度为60℃～65℃时维持3～4小时，或温度为70℃～75℃时维持1～2小时。
覆土后喷1次重水调湿，并盖薄膜保温，3天后去掉薄膜，每天通风1～2次，同时喷雾状水保持床面湿润，经10～20天，菌丝爬上覆土面，便进入出菇期管理。
