（一）严格遵守操作规程
1、先将指甲修剪干净，防止指甲损伤直肠。
2、用千分之一高锰酸钾溶液消毒手指、手臂并均匀涂抹肥皂水或凡士林。五指并拢成锥形，缓慢插入肛门口，如牛肛门关闭较紧时，先用手指触摸母牛尾根下后海穴处，或用并拢的手指锥形端放在肛门口前后刺激3～5次，母牛自然放松肛门口或排粪，即可伸手入肛门。
3、初次进行人工授精的母牛，易产生强烈的应激反应，保定难度大。要讲究保定方法，既要安全又要牢固，以免损伤直肠和生殖器。
4、直肠检查时，母牛往往用力努责，企图推出术者手臂，当母牛努责，直肠被紧拉，感觉到肠内很空荡，此时术者应用手背敲击直肠壁或停止寻找子宫，将五指并拢停留在直肠内片刻或先将手取出，待母牛直肠努责消退后，再次寻找子宫口、颈体或卵巢等。禁止在直肠内乱抓、乱摸，动作不能过大，不能随意将五指张开，应保持半握或并拢，以免引起直肠应激或损伤。
（二）直肠检查判断，适时输精
1、先掏出粪便或让母牛自动排出，排尽后将手臂沿着子宫颈成弧形缓慢往下找到子宫角，然后往左或右寻找卵巢，将左右卵巢进行对比，判断卵巢滤泡发育程度。
2、将发育卵巢轻轻夹在中指和无名指中间，用大拇指和中指轻轻触摸卵巢寻找发育的滤泡，并判定滤泡的柔软程度及滤泡液充盈度。滤泡发育的判定方法。（1）触摸较柔软，表面润滑、皮层匀称、偏大、有波动感者为有滤泡的卵巢，反之，则为没有滤泡的卵巢。（2）母牛两侧卵巢均发育，滤泡很小。（3）当滤泡表面柔软与实质相间、光滑时为一期发育卵泡。（4）当卵巢表面有突出部分（一般指头大小），而且更为柔软光滑、皮质开始变薄的为二期发育卵泡，此时离排卵期6～8小时。（5）当卵泡表现突起，皮变薄、变软，有液体，轻轻触摸时感觉好像稍微用力压就会立即破裂的为三期滤泡，也是配种的最佳时间。此时不能用力按压卵泡，否则稍有不慎就会压破。（6）如果发现母牛排出的粘液带血迹，证明已排卵。或用手触摸卵巢，发现某个部位出现凹状，表明已排卵。如果能感觉并判定排卵未完成或正在排卵的可以进行追配。
（三）输精过程要做到无菌操作
用千分之一的高锰酸钾溶液清洗母牛外阴并用于净毛巾轻轻擦拭，一只手从肛门伸入到子宫颈口处，另一只手握住装好精液的输精枪柄（不能握枪头或枪体），输精枪要求装有一次性输精枪外套，避免将污物带入母牛的子宫造成人为的污染，影响受胎率。
（四）异常情况的处理
有子宫炎、子宫异常或因先天性子宫发育不良、子宫内壁粘连的母牛不宜配种。滤泡液干、少，滤泡发育差的母牛，少配或不配。
1、有子宫炎的母牛，用青霉素240万单位、链霉素100万单位，通过输精管注入子宫进行治疗。
2、对于发情母牛子宫体粗大、坚实但卵泡发育良好的，应在配种前4～6小时，先用输精枪将青霉素240万单位、链霉素100万单位注入子宫内，净化子宫内环境，提高配种受胎率。
