1 采精 首先要准备好公狐保定架、集精环、稀释液、显微镜、电刺激采精器、冰箱、水浴锅和液氮罐等器械。采精室要保持干净卫生,室温保持在24~28℃,用紫外灯在室内照射2~3h消毒。所有的器械和操作人员的手都要消毒处理。
1.1 徒手采精法
也叫按摩采精法。采精时将公狐放进保定架内,使狐呈站立姿势。操作人员用手快速而有规律的按摩阴茎及睾丸部,促使阴茎勃起,然后翻包皮把阴茎转向后侧,用另一只手的大拇指或食指轻轻挤压龟头尖部,刺激排精。无名指和掌心握住集精环,收集精液。
1.2 电刺激采精法
也是使用较多的一种方法。让清醒或麻醉状态的公狐躺在操作台上,将涂有洗涤剂的采精仪插入直肠约10cm处进行连续刺激。不同个体引起排精反应的刺激强度不同,电流和电压适当调节。这种方法可使每只发情的公狐都能排出精液,但对公狐有明显的不良影响。
1.3 假阴道采精法
经过调教的公狐可用假阴道刺激法采精。用发情母狐诱发公狐阴茎勃起后,导入假阴道内让其排精。人工采精每日1次,连续2―3d后休息2d,也可根据狐的体况和精液的品质灵活运用。
2 精液品质的检查
采精后需对精子的密度、活力和畸形率进行检查。精子活力低于7级,畸形率超过10%时,狐的受胎率明显下降,因此输精时必须严格保证精液质量。精液的检查方法同自然交配时的检查方法相同。
3 精液稀释和贮存方法
采集到精液经过镜检后进行稀释。应根据精液的品质,母狐的输精量来确定具体的稀释倍数。每只母狐每次所输入的精子数不少于5000万个。精子的保存可分为常温保存、低温保存和冷冻保存3种。常温保存是放入39~40℃的广口保温瓶中,保温时间不超过2h;低温保存可在0―5℃的冰箱内保存,一般保存期不要超过36h:冷冻保存则是将稀释处理后的精液保存于液氮中,优点是保存时间长,便于携带运输,是一种理想的精液保存方法。但是狐精液冷冻保存技术仍需进一步的研究和完善。
4 输精
输精用输精器、保定架等用具应准备好,输精器用前应严格消毒,保证每只母狐1只,避免交叉使用,输精人员应把手充分消毒,并用温肥皂水清洗母狐的外阴部。
精液除常温保存以外,要进行升温和解冻。低温保存精液,在使用前10―15min放进10―40℃的温水浴中升温,一般需要0.5h。冷冻精液的解冻方法因冻精的剂型不同而有所差异。细管精液解冻时,是将其直接投入到30~40℃的温水中,待精液溶解后再加入1―2mg解冻液解冻。
液态精液镜检活力不低于0.7级。冷冻精液解冻后精液的镜检活力不低于0.4级,输精前精液的温度应达到35℃。
4.1 输精方法
常用的方法有输精针输精法和气泡式输精法2种。
4.1.1 输精针输精法 是用输精管先将阴道撑开,再把输精针插入到输精管内,然后一只手握住输精针,另一只手握住子宫颈,将输精针轻轻送入子宫,内,用注射器将精液注入子宫内,使用一次性输精针时,应首先将精液吸入输精针内。目前多采用将母狐倒立,使狐清醒状态下直接输精,这种方法可将精液直接输入到子宫内,使受胎率提高,此法易学,操作简单,所以目前的狐人工授精中,大部分采用此种方法。
4.1.2 气泡式输入法 人们模拟交配时“连锁”的现象而制出气泡式输精器。使用时将其送入母狐阴道内,用注射器通过输精孔注入空气,然后关闭注气孔,输精器即留在阴道内,再通过输精孔注入精液。这种方法虽然简单,但由于输精器的输精孔难以对准子宫颈口,精子直接进入子宫的机会少,受胎率低,一般较少使用。
4.2 输精量
一般每次为0.5~1.5mL,内含活精子数不得少于5000万个。
4.3 输精时间
判断输精时间可结合外阴部的变化使用试情器测定。同时检查母狐子宫颈的松软程度,如果判定比较困难,可用公狐试情,发现母狐尾静立时,接受爬跨即可进行输精。
4.4 输精次数
母狐的输精次数和间隔时间,应视公狐的精液质量、精子的存活时间和母狐发情期的长短及表现而定。精液品质较差,精子存活时间较短的可间隔2h或稍短时间,连续输3次,精液品质优良,精子存活时间长的可间隔48h输精1次,连续输2次即可。掌握母狐的排卵时间是保证输精是否成功的关键。最佳人工授精时间输精1次和掌握人工授精时间不太准确的情况下,输精2次受胎率和产仔数仍有差异,生产中为了稳妥起见都采用2次或3次输精。