三、传染病诊断

　　家兔传染病是兔病中最重要而给养兔业带来损失最大的疫病，必须尽可能早期诊断，为预防治疗提供依据，在非疫区作好预防为主的工作，在疫区做到“早、快、严、小”尽可能减少家兔死亡，降低损失，达到消灭传染病的目的。

　　为了正确诊断，必须采取各种检查疫病的方法，如流行病学、临床、微生物学及免疫学等诊断方法，也可根据传染病不同特点，采用上述某些方法或综合应用各种方法。

　　流行病学诊断：通过访问、调查，搜集有关资料进行分析研究，帮助传染病的确诊，可从以下几方面进行：

　　1?发病家兔地区有哪些传染病，最早发病时间、地点、季节，传播速度及蔓延情况，发病兔年龄、性别，品种及其感染率、发病率和死亡率。

　　2?应从家兔饲养管理，饲料配方调制方法及卫生条件及临近地区无有疫情发生。

　　3?传染病发生经过、发病前预防注射过哪些疫（菌）苗以及发病后治疗情况。

　　临床症状，剖解所见的病理变化及经过治疗的效果。

　　发病区域的地形、气候、昆虫及野生动物等与疫病发生的关系。

　　临床诊断：是诊断疫病的最基本方法，通过对疫病发生的了解，实地观察及对病、死兔剖检和测温等方法进行一般检查，另外要对疫病进行类症鉴别及疗效验证均十分重要。

　　病理解剖学诊断：每一种传染病均会有其特殊病痕，很多疾病通过尸体剖解可以了解体内各种器官的病理形态学的变化，如兔病毒性出血症（兔瘟）有肺出血等变化，巴氏杆菌病也有肺出血，所以要进行区别诊断。

　　微生物学诊断：这是查清病原体的重要手段。

　　1?细菌性疾病采取有病变的内脏器官，如心脏、肝、脾、肾、空肠、回肠、淋巴结等作为被检病料。

　　染色与镜检：取清洁玻片作被检病料的触片或涂片，自然干燥后，火焰固定，用革兰氏、美蓝或姬姆萨染液染色，待干后镜检。由于不同致病菌染色结果不一样，如A型魏氏梭菌呈革兰氏阳性大杆菌，较少能看到芽胞；巴氏杆菌呈革兰氏阴性菌，大小一致的卵圆形小杆菌。

　　分离培养：用不同的培养基如绵羊鲜血琼脂、血清琼脂等培养基，于37℃温箱培养20-24小时，再取其典型菌落接种马丁肉汤培养基，培养20-24小时，再作涂片检查及测生化反应，动物接种和血清学检验等。

　　动物接种：可以取被子检兔的脏器磨细用灭菌生理盐水作1：5或1：10稀释，也可以用分离培养菌落接种的马丁肉汤作为接种材料。一般以皮下、肌肉、腹腔、静脉或滴鼻接种家兔或小白鼠，剂量：兔0.5毫升为宜，小白鼠0.2毫升即可。若接种后兔或小白鼠发病或死亡，有典型的病理变化即可确诊。

　　血清学检验：其目的在于应用血清学方法对兔群进行普查诊断。方法有试管法和玻片法。试管法：将待检血清作成不同稀释度，分别加入等量诊断抗原，摇匀后放置于37℃温箱或室温2-3小时观察，凝集价在1：40以上者为阳性反应。玻片法：取被硷血清0.1毫升加于玻片上，同时加入等量诊断抗原，于15-20℃下摇动玻片使抗原与被检血清均匀混合，1-3分钟内观察絮状物，液体透明者为阳性。

　　2?病毒性疾病由于各种病毒在不同组织中含毒量不同，所以必须要采取含病毒量最多的组织，并要求新鲜，如兔病毒性出血症含毒量最多者是肝组织，水疱性口炎应采水疱液、水疱皮为被检材料。

　　病毒的分离培养：用被检材料接种于新鲜琼脂培养基或血清血红素培养基，结果均为阴性者则将被检材料磨细或将液体材料用无菌生理盐水（PH7.2左右）、磷酸盐缓冲液作1：10稀释用6号玻璃滤器过滤的滤液即可作为接种材料，同时在接种液中加入青、链霉素（每毫升1000单位）。

　　接种：根据接种材料可以分为下面三种方式：

　　鸡胚接种：取9-10日龄的鸡胚，每胚绒尿腔接种0.2毫升，一般在接种后48-72小时内死亡。

　　组织细胞接种：用各种动物组织的原代细胞或传代细胞接种，病毒能在细胞上繁殖，同时能使细胞产生病变。

　　动物接种：通常用小白鼠、豚鼠和家兔接种病料。有的接种家兔一般皮下、肌肉或腹腔注射0.5毫升，有的用豚鼠皮内接种，如水疱性口炎。

　　（3）病毒的鉴定：分离得到的病毒材料要以电子显微镜检查、血清学试验即可确认，进一步还需做理化和生物学特性鉴定。

　　（4）血清中和试验：在被检病料上清液中加入等量该病标准高免血清，混匀后于37℃温箱作用30分钟；对照组用生理盐水代替血清。两组材料分别接种易感动物，一般观察7天。如果血清组获保护，而对照组发病死亡即可确诊。

　　（5）兔疫学诊断：是一种重要的诊断技术，这些方法具有灵敏、快速、简易、准确的特点，用于传染病的诊断，大大地提高了诊断水平，至今应用已十分广泛。

　　在动物传染病的免疫学检验中，除凝集反应、沉淀反应、补体结合反应；中和反应等血清学检验方法外，先后又研究出兔疫扩散、变态反应、萤光抗体技术、酶标记技术、单克隆抗体技术等属于免疫学诊断的范畴。