一例新城疫的实验室诊治报告

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1发病情况及临床症状

该养鸽户饲养1.5岁的种鸽620只,10月18日给种鸽肌肉注射鸡I系苗1头份/只,30-40日龄肉鸽200只,但未免疫疫苗。鸽群发病2天,种禽死亡2只,死亡率为0.32%,肉鸽死亡78只,死亡率为39%,使用恩诺沙星进行治疗,但效果不明显。病鸽精神不振,食欲减退,饮水量增加,羽毛松乱无光泽,垂头缩颈,翅膀松散下垂,口鼻分泌物增多。部分鸽子还出现神经症状,如头颈扭曲,头向后仰。粪便先由黑色粒状,后转为黄绿色稀便。

2剖检病变

喉头、气管分泌物增多,嗦囊内充满酸臭液体及气体,腺胃乳头有出血点,心包周围、肝表面覆盖一层黄色胶胨样物。十二指肠、小肠出血,肠系膜脱落、溃疡,盲肠扁桃体肿大出血。种鸽卵巢出血。

3实验室诊断

3.1样品处理

取脾和肺进行研磨,加人生理盐水制成20%的乳剂,反复冻融3次,于零下20度保存以备用。

3.2 RT-PCIZ

RT-PCR结果见图1。



RNA提取与反转录(RT)。取制备好的病料悬液,按RNA提取试剂盒说明书进行提取,得到的RNA模板立即用于反转录。反转录体系为25微升,RNA模板16微升,引物M1 2微升,5xBuffer5微升,dNTP 2微升,RNasin0.5微升,M-MLV0.5微升。置PCR仪中42℃反转录1小时,95℃5分钟,反应结束后直接使用或于零下70度保存。

PCR扩增。取反转录产物5.0微升加入到新城疫PCB反应A混合物的PCB管中,混匀,2000转/分钟离心10秒,立即进行PCR扩增;同时设阴阳性对照。扩增条件为94度4分钟,94度30秒,56度50秒,72度50秒,35个循环,72度延伸5分钟,4度保存。取反应A的反应物0.5微升加入到新城疫PCB反应B混合物的PCR管中,混匀,2000转/分钟离心10秒,立即进行PCR扩增;同时设阴阳性对照,扩增条件为94度4分钟,94度30秒,56度50秒,72度50秒,35个循环,72度延伸5分钟,4度保存。

琼脂糖凝胶电泳。取PCR产物5微升,于1%琼脂糖凝胶中电泳,凝胶牛含有13.5微升/毫升溴化乙锭,电泳缓冲液为0.5xTAE,80伏30分钟,电泳完后于紫外灯下观察拍照,有460bp的目的带出现。

3.3病毒分离鉴定

将3.1处理的样品,加入“双抗”(青霉素、链霉素)(2000单位/毫升),感作l小时,然后离心取上清液接种10日龄的SPF鸡胚2枚,37度孵育,接种后鸡胚分别在36小时和40小时死亡,收集尿囊液,做红细胞凝集试验(HA),红细胞出现凝集,HA效价为28和27。

用新城疫阳性血清做血凝抑制试验(HI),可抑制新城疫病毒对红细胞的凝集,抑制价是27。

由此证明此鸽群发生的为新城疫病。

4防治

鸽群紧急免疫新城疫Ⅵ系苗,种鸽4羽份/只,肉鸽3羽份/只进行滴鼻。

每天的饮水中加入0.05%的氟苯尼考和3%的葡萄糖供鸽子饮用,连用3天,增强鸽子的抵抗力,防止继发感染。

保持饲料和饮水的清洁卫生,保证鸽舍的通风干燥,加强鸽舍的保暖措施,彻底清除鸽舍内的粪便及污物,用消毒剂进行消毒。

3天后回访,除肉鸽紧急免疫后死亡8只外,其余的肉鸽、种鸽病情已得到控制,并恢复正常。


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